Recherche par PCR d'OsHV-1 (Ostreid Herpesvirus type 1), dans des échantillons d'eau de claires ostréicoles Présenté par Gaëlle SOLLIEC

MINISTERE DE LA JEUNESSE, DE L’EDUCATION NATIONALE
ET DE LA RECHERCHE

ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES
Sciences de la Vie et de la Terre

MEMOIRE

pour l’obtention du diplôme de l’Ecole Pratique des Hautes Etudes


Recherche par PCR
d’OsHV-1 (Ostreid Herpesvirus type 1),
dans des échantillons d’eau de claires ostréicoles


Présenté par

Gaëlle SOLLIEC

soutenu le 29 juillet 2004

Devant le jury composé de :

A. VAN WORMHOUDT (Professeur, Laboratoire d’Evolution Moléculaire et Adaptation de Concarneau)
– Président
M. BERGOIN (Professeur, U. Montpellier II) – Responsable EPHE
H. MONTANIE (MCF, U. La Rochelle) – Examinateur
T. RENAULT (Chercheur Ifremer La Tremblade)

Travaux réalisés sous la direction EPHE du :
1Pr M. BERGOIN
et sous la responsabilité scientifique des :
2 3Dr H. MONTANIE et Dr T. RENAULT

1 Laboratoire EPHE de Pathologie comparée des Invertébrés – Université de Montpellier II
(max.bergoin@univ-montp.fr)
2 Laboratoire de Biologie et Environnement Marins – Université de La Rochelle (helene.montanie@univ-
lr.fr)
3 Laboratoire de Génétique et Pathologie – Station Ifremer de La Tremblade
(trenault@ifremer.fr)
ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES
SCIENCES DE LA VIE ET DE LA TERRE

Mémoire soutenu le 29 juillet 2004 par

EPHE Banque de Monographies SVT 1Gaëlle SOLLIEC

TITRE

RECHERCHE PAR PCR D’OsHV1 (OSTREID HERPESVIRUS TYPE 1), DANS DES ECHANTILLONS
D’EAU DE CLAIRES OSTREICOLES

RESUME

Depuis 1991, des mortalités massives associées à des infections à herpèsvirus sont rapportées chez des
larves et des juvéniles de différentes espèces de bivalves dans différentes régions du globe. Un nouveau
groupe au sein de la famille des Herpesviridae a été créé afin d’y intégrer les herpèsvirus d’invertébrés
marins avec actuellement pour unique représentant le virus infectant l’huître creuse, Crassostrea gigas,
OsHV-1. Des études ont porté sur la mise en évidence d’OsHV-1 chez les coquillages d’intérêt économique
après développement d’outils de diagnostic rapides et fiables. Ainsi, la maladie est aujourd'hui assez bien
connue. Toutefois, le devenir d’OsHV-1 dans le milieu extérieur n'a fait l'objet que de peu d'études. Aussi,
l’objectif principal de ce travail EPHE résidait dans l’étude de la persistance éventuelle du virus dans le
milieu marin, afin de mieux appréhender les modes de dissémination et de transmission d’OsHV-1 au sein
des cheptels de coquillages. Cette démarche, rendue possible par les outils moléculaires disponibles, s’avère
indispensable à l'élaboration d'une stratégie de protection des animaux, et cela par le biais d'une meilleure
compréhension de l'épidémiologie de ces infections.

Dans ce contexte, le travail a constitué d’une part, en une recherche d’ADN d’OsHV-1 par PCR
(Polymerase Chain Reaction) dans des échantillons d’eau de claires ostréicoles. Plusieurs fragments de
différentes tailles ont été amplifiés. Les amplicons obtenus présentant la taille attendue ont été séquencés
afin de vérifier leur spécificité. Aucune homologie avec OsHV-1 n’a pu être mise en évidence. Seuls
quelques fragments amplifiés par nested PCR avec les amorces OHV113/OHV114 ont une séquence
homologue à OsHV-1. Par ailleurs, certaines séquences obtenues n'ont pas présentés d’homologies avec les
séquences référencées dans les banques, rendant difficile toutes interprétations.

D’autres part, dans la littérature scientifique, des champignons unicellulaires estuariens ont été décrits
comme infectés par des virus de type herpès en microscopie électronique à transmission. Ainsi, des
champignons ont été isolés à partir des échantillons d’eau de claires ostréicoles. Parmi ces champignons, un
isolat a été sélectionné pour une approche plus complète. Ainsi, une levure du genre Cystofilobasidium a été
identifié. Une recherche d’herpèsvirus a été effectuée par PCR et en MET chez cette levure.


MOTS-CLES

Herpèsvirus, bivalves, huître creuse, OsHV-1, eau de mer, claire ostréicole, persistance, détection,
spécificité, champignons marins, isolement, virus de type herpès
TABLE DES MATIERES


LISTE DES
ABREVIATIONS.............................................................................. 8


INTRODUCTION................................................................................................
…... 10


PREMIERE PARTIE : RAPPELS BIBLIOGRAPHIQUES....…... 14

EPHE Banque de Monographies SVT 2I - Herpèsvirus chez les mollusques bivalves
marins……………………………………………………………………………………………………………………………….
14

A. Morphologie..............................................................................................
……. 15
B. Génome viral : une organisation proche du génome de HSV-1
.......................................................................................................................................
17
C. Un nouveau groupe : les herpèsvirus d’invertébrés..........
……... 19
D. Epidémiologie des infections à herpèsvirus............................
……. 20
1. Large spectre d’hôtes et persistance...................................................
….. 20
2. Influence de la température................................................................…...
21
3. l’origine géographique et transmission verticale...….
… 22
4. Influence des conditions environnementales...................................
…... 22
E. Outils diagnostiques pour rechercher OsHV-1 chez les
bivalves.........................................................................................................
…... 23
1. Réactifs immunologiques.....................................................................…... 24
a. Anticorps hétérologues.............................................................…... 24
b. Anticorps spécifiques du virus.................................................
….. 24
2. Techniques de biologie moléculaire...................................................
…... 24
F. Stabilité et persistance de l’ADN d’OsHV-1 dans l’eau de
mer................................................................................................................
…… 25

II - Les herpèsvirus dans le milieu marin....................................................
…... 27

A. Les herpèsvirus chez les vertébrés aquatiques...............….. 27
1. Herpèsvirus de mammifère marin............................................
…... 27
2. tortue.................................................................……
27
3. Herpèsvirus du poisson chat......................................................
…... 28
B. Des virus de type herpès chez des champignons
marins...........................................................................................................
…... 28

III - Les virus dans l’environnement
marin.............................................................................................................................…….. 30
EPHE Banque de Monographies SVT 3