PEG-shielded and EGF receptor targeted DNA polyplexes [Elektronische Ressource] : cellular mechanisms / vorgelegt von Katharina Freiin von Gersdorff

Dissertationzur Erlangung des Doktorgradesder Fakultät für Chemie und Pharmazieder Ludwig-Maximilians-Universität MünchenPEG-Shielded and EGF ReceptorTargeted DNA Polyplexes: Cellular Mechanismsvorgelegt vonKatharina Freiin von Gersdorffaus Frankfurt/Main20061 Introduction 2ErklärungDiese Dissertation wurde im Sinne von § 13 Abs. 3 bzw. 4 derPromotionsordnung vom 29. Januar 1998 von Herrn Prof. Dr. Ernst Wagnerbetreut.Ehrenwörtliche VersicherungDiese Dissertation wurde selbständig, ohne unerlaubte Hilfe erarbeitet.München,Dissertation eingereicht am 16. März 20061. Gutachter: Herr Prof. Dr. Ernst Wagner2. Herr PD Dr. Carsten CulmseeMündliche Prüfung am 27. April 20061 Introduction 3Table of contents1 INTRODUCTION 61.1 Gene therapy 61.2 Viral and nonviral vectors for gene delivery 71.2.1 Viral vectors 71.2.2 Nonviral vectors 71.3 Gene delivery with PEI polyplexes 81.3.1 Tissue targeting of PEI 101.3.2 Intracellular processing of PEI polyplexes 111.4 EGFR-targeting for cell-specific gene delivery 161.5 Objectives of this thesis 202 MATERIALS AND METHODS 212.1 Chemicals and reagents 212.1.1 and 212.1.2 Polyethylenimine and polyethylene glycol conjugates 222.1.3 Plasmid DNA 252.2 Cell culture 262.3 Covalent labeling of plasmid DNA 262.4 Polyplex formation 272.5 Measurement of particle size and zeta potential 282.6 Metabolic activity 282.7 Western blot 282.8 Cell synchronization 292.9 Luciferase reporter gene expression 302.9.