Confocal microscopy applied to the study of single entity fluorescence and light scattering [Elektronische Ressource] / vorgelegt von Fernando D. Stefani

CONFOCAL MICROSCOPY APPLIED TO THE STUDYOF SINGLE ENTITY FLUORESCENCE AND LIGHTSCATTERINGDissertationzur Erlangung des akademischen Grades des Dr. rer. nat.im Fachbereich Chemie der Johannes Gutenberg-Universit¨at Mainzvorgelegt vonFernando D. Stefanigeboren in Buenos Aires, ArgentinienMainz, Juli 2004Mundlic¨ he Prufung¨ am 19. November 2004Diese Arbeit wurde in der Zeit von September 2001 bis Juni 2004 unter derBetreuung von Prof. Dr. W. K. und Dr. M. K. am Max-Planck-Institut fur¨Polymerforschung in Mainz angefertigt.TheworkforthisdissertationwascarriedoutbetweenSeptember2001andJune2004 under the direction of Prof. W. K. and Dr. M. K. at the Max-Planck-Institutefor Polymer Research in Mainz, Germany.Contents1 Introduction 12 The fluorescence and light scattering confocal microscope 52.1 The confocal principle . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52.2 Description of the home built confocal microscope . . . . . . . . . . . 82.2.1 Light sources and illumination . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82.2.2 Scanning . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 122.2.3 Detection . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 162.2.4 Time Correlated Single Photon Counting . . . . . . . . . . . . 192.2.5 Computer control . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 212.3 Alignment . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 222.3.1 Light coupling into the single mode fiber . . . . . . . .