MINISTÈRE DE L'ÉDUCATION NATIONALE DE LA RECHERCHE ET DE LA TECHNOLOGIE
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Français
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2003
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Niveau: Supérieur
MINISTÈRE DE L'ÉDUCATION NATIONALE, DE LA RECHERCHE ET DE LA TECHNOLOGIE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la Vie et de la Terre MEMOIRE Présenté par Justine Dumay Pour l'obtention du diplôme de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes CONTRIBUTION A L'ANALYSE DE LIPIDES ISSUS DE BIOMASSES MARINES EN VUE DE LA RECHERCHE DE MOLÉCULES À ACTIVITÉ BIOLOGIQUE. Soutenu le 15 mai 2003. Devant le jury suivant : Monsieur Benoît DEFFONTAINES – Président du jury Monsieur Alain VAN WORMHOUDT – Rapporteur Monsieur Gilles BARNATHAN – Examinateur Monsieur Jean-Pascal BERGE - Examinateur Laboratoire Evolution moléculaire et adaptation. Directeur : Dr A. Van Wormhoudt. Station de biologie marine BP 225 29182 CONCARNEAU cedex Laboratoire de Génie alimentaire. Directeur : Dr J.L. Vallet IFREMER, centre de Nantes Maître de stage : Dr J.P. Bergé BP21105 44311 NANTES cedex 3 EPHE Banque de Monographies SVT 1
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- mémoire
MINISTÈRE DE L'ÉDUCATION NATIONALE, DE LA RECHERCHE ET DE LA TECHNOLOGIE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la Vie et de la Terre MEMOIRE Présenté par Justine Dumay Pour l'obtention du diplôme de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes CONTRIBUTION A L'ANALYSE DE LIPIDES ISSUS DE BIOMASSES MARINES EN VUE DE LA RECHERCHE DE MOLÉCULES À ACTIVITÉ BIOLOGIQUE. Soutenu le 15 mai 2003. Devant le jury suivant : Monsieur Benoît DEFFONTAINES – Président du jury Monsieur Alain VAN WORMHOUDT – Rapporteur Monsieur Gilles BARNATHAN – Examinateur Monsieur Jean-Pascal BERGE - Examinateur Laboratoire Evolution moléculaire et adaptation. Directeur : Dr A. Van Wormhoudt. Station de biologie marine BP 225 29182 CONCARNEAU cedex Laboratoire de Génie alimentaire. Directeur : Dr J.L. Vallet IFREMER, centre de Nantes Maître de stage : Dr J.P. Bergé BP21105 44311 NANTES cedex 3 EPHE Banque de Monographies SVT 1
- brosme brosme
- flamme ionisation
- octadécènoïque
- chromatographie en phase gazeuse
- profit de la recherche et du développement
- lipide neutre
- molva molva
- docosahexaenoic acid
MINISTÈRE DE L’ÉDUCATION NATIONALE, DE LA RECHERCHE ET DE LA TECHNOLOGIE
ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la Vie et de la Terre
MEMOIRE Présenté par Justine Dumay Pour l’obtention du diplôme de l’Ecole Pratique des Hautes Etudes CONTRIBUTION A L’ANALYSE DE LIPIDES ISSUS DE BIOMASSES MARINES EN VUE DE LA RECHERCHE DE MOLÉCULES À ACTIVITÉ BIOLOGIQUE. Soutenu le 15 mai 2003. Devant le jury suivant : Monsieur Benoît DEFFONTAINES Président du jury Monsieur Alain VAN WORMHOUDT Rapporteur Monsieur Gilles BARNATHAN Examinateur Monsieur Jean-Pascal BERGE -Examinateur Laboratoire Evolution moléculaire et adaptation. Directeur : Dr A. Van Wormhoudt. Station de biologie marine avw@mnhn.fr BP 225 29182 CONCARNEAU cedex Laboratoire de Génie alimentaire. Directeur : Dr J.L. Vallet IFREMER, centre de Nantes Maître de stage : Dr J.P. Bergé BP21105 jpberge@ifremer.fr 44311 NANTES cedex 3
RÉSUMÉ L’analyse et la purification des lipides en laboratoire est en constante évolution grâce au perfectionnement de techniques anciennes et à la découverte de nouveaux procédés. Ces nouvelles méthodes, mises au profit de la recherche et du développement permettent de trouver de nouvelles voies de valorisation pour des matrices inutilisées jusqu’alors. Les objectifs de ce travail sont d’une part, d’optimiser les techniques existantes de séparation de composés lipidiques issus de matrices marines, et, d’autre part, de caractériser et valoriser certaines de ces matrices. Ce travail a permis la calibration d’un appareil de CPG autorisant en routine l’identification et la quantification de 45 acides gras référencés. Ceux qui ne le sont pas peuvent quand même être identifiés par le biais de calcul mathématiques (LCE et LCF) et quantifiés par approximation avec les courbes de calibration des acides gras qui leur sont proches. Un protocole d’analyse des différentes classes de lipides neutres (MAG, DAG, TAG, Cholestérol, esters de cholestérol, alcools gras et acides gras libres) a aussi été mis au point en faisant intervenir une dérivatisation préalable des composés (dérivés TMS) et une analyse en chromatographie en phase gazeuse. Cette méthode permet actuellement de séparer distinctement 38 lipides neutres. Pour les phospholipides, la méthode de séparation développée en chromatographie liquide haute performance (CLHP) permet d’isoler 13 (lyso)formes : PA, LPA, PC, LPC, PE, LPE, PG, LPG, PI, PS, LPS, CA, SM. D’autre part, au travers d’une étude intégrée dans le programme Européen « Utilisation and stabilisation of by-products from Cod species » la caractérisation lipidique des co-produits (foie, viscères œufs et cut off) de Gadidés ( Gadus morhua, Molva molva, Pollachius virens, Brosme brosme et Melanogrammus aeglefinus ) a été réalisée. Les résultats de cette étude (teneur en eau ; teneur en lipides, teneur en phospholipides) indiquent que seul le foie peut être isolé des autres co-produits et faire l’objet d’une exploitation séparée pour son huile. Parallèlement à cette caractérisation biochimique partielle, un criblage préliminaire de ces co-produits (plus la tête, les arrêtes, la laitance et la peau) sur trois espèces ( Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus ) indique la présence de composés bioactifs dans les lipides neutres et les phospholipides Mots clés : lipide, acide gras, lipide neutre, phospholipide, chromatographie, phase normale, Gadidés, co-produits.
TABLE DES MATIÈRES INTRODUCTION GENERALE GENERALITES 1. R APPELS SUR LES LIPIDES ET LES LIPOÏDES 1.1. Les lipides 1.1.1 Définition 1.1.2 Les acides gras 1.1.3 Les lipides simples 1.1.3.1 Les glycérides ou acylglycérols 1.1.3.2 Les cires ou cérides 1.1.3.3 Les stérols 1.1.3.4 Les stérides ou esters de stérols 1.1.4 Les lipides conjugués 1.1.4.1 Les glycolipides
