INMUNOGENICIDAD DE LA PROTEÍNA RECOMBINANTE ASP1R DE Ancylostoma caninum EN UN MODELO MURINO (IMMUNOGENICITY OF THE PROTEIN RECOMBINANT ASP1r OF A caninum IN A MURINE MODEL)

Resumen
Objetivo. Construir un plásmido recombinante que exprese la proteína ASP1r de Ancylostoma caninum y evaluar su capacidad inmunogénica en un modelo murino. Materiales y métodos. Se realizó extracción de ARN de parásitos adultos de Ancylostoma caninum, se amplificó por RT –PCR el gen de la proteína ASP1. Este gen fue insertado en el vector pcDNA3. El inserto fue digerido con Bamh1 y EcoR1 y clonado direccionalmente. Posteriormente, se llevó a cabo transformación y selección de las células de E. coli DH5a competentes con el producto de la ligación. Se realizó un tamizaje por PCR confirmando la presencia del gen ASP1. El vector pcDNA3-ASP1 fue administrado vía intraglandular en la parotida e intramuscular en ratones Balb/c. En estos animales se les realizó determinación de anticuerpos en suero y saliva mediante las técnicas de ELISA e inmunohistoquímica. Resultados. Se determinó que el plásmido pcDNA3-ASP1 fue incorporado y expresado células E. coli DH5a. Este plásmido recombinante indujo la producción de anticuerpos Anti-ASP1 específicos en ratones Balb/c. Conclusiones. Se logró demostrar que la utilización de pcDNA3-ASP1 no produjo reacciones desfavorables en ratones Balb/c, además indujo respuesta humoral contra la proteína pcDNA3-ASP1 de excreción/secreción de Ancylostoma caninum en ratones.
Abstract
Objectives. To construct a recombinant plasmid expressing the ASP1r protein of A. caninum and evaluate its immunogenic capacity in a murine model. Materials and methods. RNA of adults of Ancylostoma caninum was amplified by reverse transcription polymerase chain reaction. The ASP1 protein gene was inserted into the pcDNA3 vector. Plasmid was digested with Bamh1 and EcoR1 and cloning was performed directionally. Later a transformation and selection of E. coli DH5a cell competent with the product for the ligation was made. Then, a screening by PCR was carried out to confirm the presence of ASP1 gene. PcDNA3-ASP1 was inoculated by intraglandular parotide and intramuscular route in Balb/c mice. Antibodies in these animals was measured in serum and saliva by ELISA and immunochemistry. Results. PcDNA3-ASP1 was incorporated and expressed in E. coli DH5a cell. This recombinant plásmid was able to produce antibodies anti-ASP1 specific in Balb/c mice. Discussion. It was possible to demonstrate that using of pcDNA3-ASP1 did not display reactogenicity and it did not produce unfavorable reactions, futhermore, it induced a humoral response against the excreción/secretion protein of Ancylostoma caninum in mice.