ESTUDIO DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA DE 20 ACCESIONES DE CACAO (Theobroma cacao L.) MEDIANTE AP-PCR DE LA COLECCIÓN DEL CENTRO DEL CACAO DE AROMA TENGUEL EN LA FINCA EXPERIMENTAL LA BUSETA

Resumen
El presente estudio consistió en determinar la diversidad genética basada en los marcadores RAPD´s (Random Amplification of Polymorphic DNA) de 20 accesiones de cacao (Theobroma cacao L.)de la variedad Nacional, con características de productividad, y niveles de resistencia, susceptibilidad y tolerancia a las rincipales enfermedades causadas por hongos como Ceratocistys fimbriata, Moniliophtora roreri y Crinipelis perniciosa. Este germoplasma de cacao se encuentra localizado en el Centro de Cacao de Aroma Tenguel, en la Finca Experimental “La Buseta” propiedad de la Universidad Técnica Estatal de Quevedo. La extracción de ADN se la realizó utilizando el protocolo de Doyle & Doyle (1990) con algunas modificaciones. 14 oligonucleótidos fueron utilizados para la obtención de marcadores RAPD´s, de los cuales 9 amplificaron productos reproducibles OPA-15, OPC-07, OPC-9, OPC-4, OPC-3, OPC-1, OPA-12 OPC-13 y OPA-7. Los productos de amplificación fueron migrados en geles de agarosa al 1.2% a 90 voltios por una hora. Los marcadores moleculares fueron analizados por medio de una matriz de datos binarios para calcular las distancias genéticas. Los nueve cebadores utilizados generaron 67 bandas de las cuales 59 (88%) fueron polimórficas. El dendrograma mostró dos grupos A y B, en el grupo A se incluyo dos accesiones, y en el grupo B se encuentran los 18 restantes el cual incluye 2 subgrupos B1 y B2 en el subgrupo B1 se incluye la accesión (L-22-H-40), y en el subgrupo B2 están incluidas las accesiones que poseen características de productividad. El nivel de diversidad más alto se obtuvo con los oligonucleótidos OPC 04 (0.80), OPC 07 (0.82). El cebador OPC 01 (0.37) reportó el nivel más bajo. Las accesiones (L-22-H-40) (O.75), (L-34-H-07) (0.86) y el (L-42-H-60) (0.72) presentaron los niveles de variabilidad más altos, siendo los valores más bajos los mostrados por las accesiones (L-26-H-64) (O.48) y (L-23-H63) (O.47). El valor de la diversidad total (HT) obtenida para las 20 accesiones de T. cacao mediante RAPD fue de 0.636.
Abstract
The present study consisted of determining the genetic diversity based on the scoreboards RAPD's (Random Amplification of Polymorphic DNA) of 20 accessions of cocoa (Theobroma cocoa L.) of the National variety, with characteristics of productivity, and levels of resistance, susceptibility and tolerance to the principal diseases caused by fungi as Ceratocistys fimbriata, Moniliophtora roreri and Crinipelis perniciosa. This germoplasma of thief is located in the Center of Cocoa of Aroma Tenguel, in the experimental estate "The Buseta" property of the Technical State University of Quevedo. The extraction of DNA realized it using the protocol of Doyle and Doyle (1990) with some modifications. 14 oligonucleótidos were used for the obtaining scoreboard RAPD's, of which 9 amplified reproducible products OPA-15, OPC-07, OPC-9, OPC-4, OPC-3, OPC-1, OPA-12 OPC- 13 y OPA-7. The products of amplification were migrated in gels of agarosa to 1.2 % to 90 volts for an hour. The molecular scoreboards were analyzed by means of a counterfoil of binary information to calculate the genetic distances. Nine used powderhorns generated 67 bands of which 59 (88 %) was polymorphic. The dendrograma showed two groups A and B, in the group A include two accessions, and in the group B the 18 remaining ones are which includes 2 subgroups B1 and B2 in the subgroup B1 includes the accession (L-22-H-40), and in the subgroup B2 there are included the accessions that possess characteristics of productivity. The level of diversity more high were obtained with the oligonucleótidos OPC 04 (0.80), OPC 07 (0.82). The powder-horn that brought (reported) the lowest level was OPC 01 (0.37). The accessions that presented the levels of variability more high places were the (L-22-H-40) (Or 75), (L-34-H-07) (0.86) and the (L-42-H-60) (0.72) whereas the lowest values them showed the accessions (L-26-H-64) (Or 48) and (L-23-H63) (Or 47). The value of the total diversity (HT) obtained for 20 accessions of T. cocoa by means of RAPD was of 0.636.